發表日期:2017/11/28 來源:托普云農 瀏覽次數:2167次
DNA一直是生物學中重要研究對象,通過它的遺傳特性也能為農業育種提供巨大幫助,今天小編就針對植物DNA的提取為大家做下介紹,其中著重講一講樣品的研磨步驟:
一、樣品研磨
1) 取1g的樣品放入2ml樣品管中;
2) 加入1-2粒5mm研磨珠;
3) 加入1ml的CTAB 抽提液;
4) 將加有樣品的樣品管放入高通量組織研磨儀的適配器中,蓋好;
5) 將研磨轉速調到1800,設定研磨時間為90秒(可根椐樣品的研磨的難易程度來調節,此數據是以銀杏為樣本得出);
6) 啟動研磨儀對樣品進行研磨(根據不同的樣品,本身性質不同,需要對研磨頻率和研磨時間進行適當的調整)。

二、DNA的粗提
1) 將高通量組織研磨儀研磨好的樣品取出于65℃水浴45min,中途間隔(輕柔)振蕩三次混勻;
2) 冷卻后加入等體積氯仿:異戊醇(24:1),輕柔顛倒混勻使乳化10min;
3) 7000g-8000g離心10min(18-20℃);
4) 吸取上清于另一干凈的離心管中;
5) (根據需要可用氯仿:異戊醇如上法重復抽提一次,吸取上清);
6) 加入與上清液等體積(且已于-20℃預冷的異丙醇,顛倒混勻,約1至2分鐘后應有白色絮狀沉淀出現;
7) 離心法沉淀DNA;
8) 在75%乙醇中漂洗DNA數分鐘以上,用Tip頭吸干乙醇;
9) 用1ml 75%乙醇再漂洗一次;
10) 沉淀于室溫或64℃以下的恒溫箱中干燥片刻至剛出現半透明,不要過度干燥;
11) 用50μlTE溶解沉淀,可用65℃水浴助溶,DNA粗提物可用于粗略PCR等。
利用高通量組織研磨儀對要進行DNA提取的植物樣品研磨的好處在于:研磨過程中,不會對植物組織造成破壞,可根據需要選擇干磨、濕磨及冷凍研磨,封閉式的樣品管,避免樣品交叉污染。